宠物抗体如何检测?
相信许多养宠物的人们,都有一个疑惑,自己的宠物究竟感染没感染细小和冠状,但是又不敢贸然去医院检查,怕真的感染的话,给自己和宠物带来伤害。今天小编就来教大家如何检测宠物人体内是否含有抗体。
检测方法
采用双缩脲法或辣根过氧化酶法,以标准血清作阳性对照,以灭菌生理盐水作阴性对照,测定结果以O.D值表示,≥0.80C者为阳性。
1.被检血清蒸馏水4份,2份0.1ml/只。
2.被检血清0.5ml,加双缩脲试剂0.5ml,混匀,在室温下放置5min,以生理盐水调O.D值为0.80。
3.3ml/只,在4℃ ,放置24h。
4.用0.8%的盐水稀释,以防凝固现象。
5.用pH值7.0~8.0的PBS缓冲液调整到所需浓度。
6.在波长560nm处测量吸光度值,以蒸馏水作参考,将所测各管(包括阴、阳、标准对照)的吸光度值归一化。
7.抗体滴度判定(表1)。
注意事项
1. 双缩脲试剂与血清蛋白的结合反应,不受pH值、盐类、稀释等因素的影响,而且反应迅速、简便,适于大量样品的筛检。
2. 被检样品为血清或血浆时,应先将血清分离后测定;如有明显蛋白质凝集或沉淀,宜过滤或加酶消化后测定。
3. 溶血或血球碎屑可污染试剂,出现非特异性反应。必要时可用丙二醇或洗涤剂制片,于低倍显微镜下检查。
4. 如受到细菌污染,出现腐败现象,可加稀释倍数至适宜,并及时使用。
5. 本试剂只指示抗体存在。对于检测阳性血清是否具感染意义,须复核虫抗体。
6. 细菌内毒素会对人及动物健康造成危害,若药液出现浑浊或变质,可能存在细菌内毒素,使用时务必谨慎。
7. 应放置在阴凉、干燥、密闭的地方保存。
8. 本试剂不宜冷藏。